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信帆提供:IP类实验代测服务

信帆提供:IP类实验代测服务

简要描述:

信帆提供:IP类实验代测服务
RIP实验基本原理:
1.用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。
2.防止非特异性的RNA的结合。
3.免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA-起分离出来。
4. 结合的RNA序列通过mi scroarrax(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。

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免疫共沉淀(Co-IP蛋白与蛋白)

疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在agarose,beads.上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。


CHIP实验(DNA-蛋白相互作用)

染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。染色质免疫沉淀技术般包括细胞固定,染色质断裂,染色质免疫沉淀,交联反应的逆转,DNA 的纯化,以及DNA鉴定。因为ChIP实验涉及的步骤多,结果的重复性较低,所以对ChIP实验过程的每一步都应设计相应的对照,而且对结果的分析也需要有一定的经验。对于刚刚开始使用ChIP技术的研究人员来说,使用成熟的商品化试剂盒和相关的技术服务会达到事半功倍的效果。


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RIP实验基本原理:

1.用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。

2.防止非特异性的RNA的结合。

3.免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA-起分离出来。

4.结合的RNA序列通过mi scroarrax(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。


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