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链亲和素琼脂糖凝胶FF
英文名称:Streptavidin Berpharose FF
货号:B2830
规格:5ml
1.产品介绍
链霉亲和素琼脂糖凝胶FF(Streptavidin Berpharose FF)是一种将链霉亲和素(Streptavidin)键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和层析分离介质,利用生物-素与链霉亲和素配体之间的相互作用分离纯化生物-素或生物-素化的抗原、抗体、核酸等物质。
链霉亲和素与生物之间的亲和力很强,需要在变性条件下洗脱,这个特性可用于抗原与抗体的分离,如将生物-素化的抗体结合在凝胶上,然后利用抗原抗体的亲和特性纯化无生物-素化的抗原,抗原洗脱时抗体不会被洗脱。链霉亲和素对亚氨基生物-素的亲和力相对较弱,可以在pH9.5-11.0结合,pH4.0时洗脱,不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。
2.规格
1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、20ml、100ml、500ml 纯化流程
①缓冲液:
(1)纯化生物-素或生物-素化物质
结合缓冲液:20mM NaH2PO4, 150mM NaCl,pH7.4
洗脱缓冲液:8M盐酸胍,pH1.5
(2)纯化2-亚氨基生物-素或2-亚氨基生物-素标记的物质
结合缓冲液:50mM碳酸铵,500mM NaCl,pH10.0
洗脱缓冲液:50mM乙酸铵,500mM NaCl,pH4.0
(3)纯化抗原或抗体
结合缓冲液:20mM NaH2PO4,150mM NaCl,pH7.4
洗脱缓冲液:100mM甘-氨酸-盐酸,pH3.0
注:
用于生物-素化的抗体纯化未生物-素化的抗原(或生物-素化的抗原纯化未生物-素化的抗体)有2种方法,①可先在游离状态下抗原与抗体结合,然后当样品纯化即可;②也可以将生物-素化的抗体(或抗原)先结合柱上,然后对应的未生物-素化的抗原(或抗体)当样品纯化。
②样品准备
上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45μm滤膜或高速离心去除不溶物。
③样品纯化
(1)取适量的链霉亲和素琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中,用结合缓冲液平衡5个柱体积,建议流速为100cm/h。
(2)将准备好的样品缓慢上柱,为保证样品与链霉亲和素充分结合,应控制好上样流速,建议流速为15-50cm/h。
(3)上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上,或平衡至基线,洗去杂质,推荐流速为100cm/h。
(4)用洗脱缓冲液洗10-20个柱体积,建议流速为100cm/h,收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围,并根据需要置换缓冲液。
(5)洗脱目的蛋白后的柱子应立即用中性的结合缓冲液平衡,并用20%乙醇保存柱子,或进行下一次纯化。
6.注意事项:
1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。
2)去除一些沉淀或变性物质,建议使用下面的方法用2倍柱体积的0.1M NaOH或6M盐酸胍或8M尿素溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质3-4倍柱体积70%乙醇或2倍柱体积的1% TritonX-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH 7.4清洗。
3)本产品保存条件为20%乙醇,4~8℃。
4) 2-25℃,常压,避光运输。
5)仅供科研实验使用。
链亲和素琼脂糖凝胶FF