链亲和素琼脂糖凝胶FF

链亲和素琼脂糖凝胶FF

英文名称：Streptavidin Berpharose FF

货号：B2830

规格：5ml

1.产品介绍

链霉亲和素琼脂糖凝胶FF（Streptavidin Berpharose FF）是一种将链霉亲和素（Streptavidin）键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和层析分离介质，利用生物-素与链霉亲和素配体之间的相互作用分离纯化生物-素或生物-素化的抗原、抗体、核酸等物质。

链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，需要在变性条件下洗脱，这个特性可用于抗原与抗体的分离，如将生物-素化的抗体结合在凝胶上，然后利用抗原抗体的亲和特性纯化无生物-素化的抗原，抗原洗脱时抗体不会被洗脱。链霉亲和素对亚氨基生物-素的亲和力相对较弱，可以在pH9.5-11.0结合，pH4.0时洗脱，不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。                   

2.规格

1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、20ml、100ml、500ml 纯化流程

①缓冲液:

（1）纯化生物-素或生物-素化物质

结合缓冲液：20mM NaH2PO4, 150mM NaCl，pH7.4

洗脱缓冲液：8M盐酸胍，pH1.5

（2）纯化2-亚氨基生物-素或2-亚氨基生物-素标记的物质

结合缓冲液：50mM碳酸铵，500mM NaCl，pH10.0

洗脱缓冲液：50mM乙酸铵，500mM NaCl，pH4.0

（3）纯化抗原或抗体

结合缓冲液：20mM NaH2PO4，150mM NaCl，pH7.4

洗脱缓冲液：100mM甘-氨酸-盐酸，pH3.0

注：

用于生物-素化的抗体纯化未生物-素化的抗原（或生物-素化的抗原纯化未生物-素化的抗体）有2种方法，①可先在游离状态下抗原与抗体结合，然后当样品纯化即可；②也可以将生物-素化的抗体（或抗原）先结合柱上，然后对应的未生物-素化的抗原（或抗体）当样品纯化。

②样品准备

上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45μm滤膜或高速离心去除不溶物。

③样品纯化

（1）取适量的链霉亲和素琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中，用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为100cm/h。

（2）将准备好的样品缓慢上柱，为保证样品与链霉亲和素充分结合，应控制好上样流速，建议流速为15-50cm/h。

（3）上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上，或平衡至基线，洗去杂质，推荐流速为100cm/h。

（4）用洗脱缓冲液洗10-20个柱体积，建议流速为100cm/h，收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。

（5）洗脱目的蛋白后的柱子应立即用中性的结合缓冲液平衡，并用20%乙醇保存柱子，或进行下一次纯化。

6.注意事项：

1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。

2)去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法用2倍柱体积的0.1M NaOH或6M盐酸胍或8M尿素溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质3-4倍柱体积70%乙醇或2倍柱体积的1% TritonX-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

3)本产品保存条件为20%乙醇，4~8℃。

4) 2-25℃,常压,避光运输。

5)仅供科研实验使用。

链亲和素琼脂糖凝胶FF