蛋白G琼脂糖凝胶

蛋白G琼脂糖凝胶

英文名称：Protein G Berpharose FF

1.产品介绍

链球菌G蛋白（Streptococcus Protein G，SPG）是G、C型链球菌细胞壁中的一种蛋白质，能特异性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段结合而不影响其Fab段与抗原分子结合的能力，其亲和填料可以用于从血清、腹水、组织培养物等上清中结合吸附并纯化免疫球蛋白（抗体）。

2.规格

1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、25ml、100ml、500ml、1L纯化流程

应用举例：

结合缓冲液：20mM磷酸缓冲液、150mMNaCl、pH7.0

洗脱缓冲液：0.1M甘-氨酸，PH3.0或0.1M柠檬酸缓冲液，pH 4.0

中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

1) 1ml重组蛋白G琼脂糖凝胶预填柱，用5-10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液。

2)用结合缓冲液平衡5-10个柱床体积。

3)将5ml人多抗血清用结合缓冲液稀释至50ml，0.45μm滤膜过滤上样。

4)用结合缓冲液平衡5-10个柱床体积至基线。

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性。

6)每次使用后依次使用3个柱体积的结合缓冲液，5个柱体积的去离子水，5个柱体积的20%的乙醇平衡保存，防止填料被细菌污染。

7) SDS-PAGE电泳分析。

 6.注意事项：

1)样品洗脱后一般pH很低，应立刻用碱性中和缓冲液（如1MTris-HCl，pH8.5）将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5-10%、pH7.5的缓冲液（如1MTris-HCl或1M磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。

2)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。

3)填料再生清洗：随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，严重影响纯化效果，这时需要对填料进行再生清洗（如下步骤）

去除沉淀或变性物质：用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。

去除疏水性吸附造成的非特异性吸附物质：用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗，然后然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗

4)本产品保存条件：20%乙醇，4~8℃。