镍琼脂糖凝胶 Ni(NTA)

镍琼脂糖凝胶 Ni(NTA)

英文名称：Ni Berpharose FF-NTA

货号：B2776

1.      产品介绍

镍-琼脂糖凝胶FF(NTA)以琼脂糖微球为基质，活化偶联次氮基三乙酸（NTA），之后螯合Ni2+。镍-琼脂糖凝胶FF(NTA)主要用于分离能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带 His标签的重组蛋白。 

镍 NTA琼脂糖凝胶 FF具特异性好，螯合镍更稳定，不易脱落，能耐受一定强度的还原剂，物理和化学稳定性好。

2.规格

1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、20ml、100ml、500ml

3.产品性能

性能

指标

基质

6%琼脂糖微球

配基

Ni2+

载量

≥40mg His标签蛋白/ml

粒径

45-165μm

建议流速

50-300 cm/h

耐压

0.3MPa

工作温度

4-40℃

pH稳定范围

3-10

储存缓冲液

20%乙醇

储存温度

4-8℃

4.纯化流程

①平衡

镍-琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。

建议流速为100 cm/h。

②上样

（1）样品一般溶解于pH6-8的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。

（2）常用缓冲液有10-100 mM磷酸钠缓冲液、20-200 mM Tris-HCl缓冲液等。

（3）缓冲液中一般要加入0.15-0.5 M的NaCl以消除离子交换作用。

（4）初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时，推荐使用50 mM PBS（50 mM NaH2PO4、0.3 M NaCl、pH 8.0）作为初始缓冲液。

③洗脱

（1）增加咪唑浓度进行洗脱是镍-琼脂糖凝胶FF最-常-用的洗脱方法。

（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。

（3）初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时，如不确定洗脱需要的咪唑浓度，推荐在初始缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑，浓度从低

到高分别洗脱和收集重组蛋白，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。

（4）有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。

洗脱方法：

（1）降低pH洗脱：大多数蛋白在pH4-6会被洗脱下来（也可以在pH 3~4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。

（2）竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度（如0-0.5M咪唑、0-50 mM组-氨酸、0-2M NH4Cl）。梯度洗脱最好在起始缓冲液的恒定pH值下进行。

 5.在位清洗

（1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：使用1.5M NaCl溶液接触时间为10-15分钟清洗，然后，再使用去离子水清洗10个柱体积。

（2）去除强疏水性蛋白和脂质等：通过使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20分钟可以去除此类污染物。

然后，再使用10倍柱体积的去离子水清洗。也可以选择使用含有去污剂的酸性或碱性溶液， 清洗填料2倍柱体积。例如，含有0.1–0.5%  非离子去污剂的0.1 M  醋酸溶液，接触时间 为1–2  小时。去污剂处理后，需要使用70%的乙醇清洗5个柱体积，以彻-底去除去污剂。 最后使用10倍柱体积的去离子水清洗。

5.注意事项：

1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。

2)本产品保存条件为20%乙醇，4-8℃。

3) 2-25℃，常压，避光运输。

4）仅供科研实验使用。

镍琼脂糖凝胶 Ni(NTA)