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C肽放射免疫分析试剂盒

C肽放射免疫分析试剂盒

简要描述:

C肽放射免疫分析试剂盒,C肽(C-Peptide)又称连接肽,由胰岛β细胞分泌,它与胰岛素有一个共同的前体胰岛素原。胰岛素原裂解成1个分子的胰岛素和1个分子的C肽,因此C肽与自身胰岛素摩尔量是*的。

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C肽放射免疫分析试剂盒

通用名:碘[ 125I]人 C 肽放射免疫分析药盒

汉语拼音:Dian [ 125I] Ren C-tai Fangshemianyifenxi Yaohe

英文名:Iodine [ 125I] Human C–peptide Radioimmunoassay Kit

简称:碘[ 125I]- C-P 放免药盒 [使用目的] 用于人血清样本中 C 肽(C-P)的定量测定

[用途] 1) 指导胰岛素治疗,对于胰岛素治疗的病人,C 肽测定可以确定是否继续使用胰岛素治 疗,还是用口服降糖药或饮食治疗。C 肽的测定值对糖尿病的治疗具有重要意义。 2) 对低血糖综合症的诊断。 3) 对胰岛移植和胰腺移植的病人,C 肽测定可以了解移植是否存活和 B 细胞的功能。 4) 同时测定 C 肽和胰岛素可了解肝病的变化,如肝硬化时,外周血 C 肽/胰岛素的比值下 降。 5) 对胰岛或胰腺肿瘤治疗后复发和功能的诊断。

[试验原理] 本药盒采用竞争放射免疫分析法,通过二抗沉淀抗原-抗体免疫复合物来测定血清中 C 肽的含量,待测血清、标准品中的 C 肽和 125I-C–P 与有限量的抗体竞争结合。125I-C–P 一 部分与抗体结合为复合物,另一部分游离。加入分离试剂,离心使复合物部分沉淀,与游离 部分分离,弃去上清液,测定沉淀物的放射性计数。待测血清和标准中的 C 肽含量与与复合 物的放射性强度呈负相关,用一系列不同浓度的 C 肽作标准,可获得标准曲线,从标准曲线 上可查出血清中 C 肽的含量。

[仪器] 1、 γ-计数器 2、 低温离心机 3、 恒温水浴箱 [样本要求] 110 微升人血清样本。 采静脉血 5ml 于塑料试管中,静置使其凝固后,1500 转/分离心,取其上清液,放置玻 璃瓶中。如果样本不立即使用,可在-18℃~-25℃储存 6 个月。 严重溶血、高浓度的脂类、胆红素对测定结果有影响。

[注意事项] 1) 收到分析试剂盒后,尽快存放在 2 – 8℃。 2) 由于 C 肽在溶液状态下极不稳定,所以先溶解标记物、抗体,待一切准备工作完毕后, 最后溶解标准品。如果分析试剂盒一次用不完,要做若干次,那么把标准品溶解后尽快 分装成若干份,并立即存放在–20℃保存,避免反复冻融。C 肽标记物的分装、使用、 保存同标准品程序,避免反复冻融。 3) 在加分离试剂前,将分离试剂摇匀。 4) 分析试管放在 4℃温育时,好套上塑料袋,避免蒸发,保持一定的反应体积。

[实验方法] 1、 将实验所需试剂及样本放置室温,冻干品按操作要求进行溶解,平衡至少 30 分钟 以上才可进行操作; 2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管进行编号,所有实验均做双管重复; 3、 每个 NSB 管加入 200µl 温育液,每个标准品“0”管 加入 100µl 温育液; 4、 取每个浓度的标准品(A~F)、质控血清和样本 100µl 加入相应编号的试管中; 5、 每管均各加入 100µl 标记物工作液; 6、 除 T、NSB 管外,每管均各加入 100µl 抗体工作液,充分混匀; 7、 4℃温育 24 小时; 8、 每管均各加入 500µl 分离剂后,充分混匀; 9、 室温放置 15 分钟后,离心 3500 转/分,20 分钟后,吸去或倾倒掉上清液; 10、 用 γ-计数器测定每管 1 分钟的放射性强度计数; 11、 从标准曲线上读取样本及质控血清的浓度。

[实验过程中应注意] 1、 γ-计数器本底计数应≤100CPM/分,效率应≥75%; 2、 加入放射性标记物时,应做好防护、小心谨慎,以避免造成放射性污染; 3、 如果某一个样本的测定值高于最高浓度的标准品浓度,用零标准品以 1:2 或 1: 4 的比例稀释样本后重新测试,测试结果乘以相应的稀释倍数。

[质量控制] 每次实验操作应至少采用两个浓度的质控血清进行质量控制,以确保每次实验测定结果 的可靠性。 1、 质控血清的平均值应在允许范围内; 2、 曲线方程应采用佳拟合方式; 3、 重复样本的测定结果相差在 15%以内。 如不能同时满足以上条件,则此次试验结果无效,全部试验需重新进行。

[测定结果的计算] 1、 计算标准品(A~F)、质控品和样品与标准品 0 的比值(B/B0); 2、 剂量-反应曲线按“对数剂量-结合率对数”(Log(dose-Log(B/ B0))数学模型或 四参数数学模型拟合,通过每个标准品的 B/B0和其浓度建立标准曲线; 3、 从标准曲线上查出样本的浓度值,B/B0不在标准曲线之内的样本及其浓度

[实验的局限性] 1、 本品仅供体外诊断使用,只能用于人血清样本的测定而不能用于其他体液样本; 2、 通过其它方法得到的 C-P 值与本品测定结果不具有直接的可比性;

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