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rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

简要描述:

重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

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所有产品仅供科研使用,不能用于食用和医疗等

rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

产品描述

重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-GlyrTEVpH 7.030°C时可达到*活性,但在pH 6.0-8.5和温度4-30°C的广泛范围内皆有活性(见表1),使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。

1. 不同温度下rTEV酶切活性

反应时间

不同温度下剪切活性(%)

4°C

16°C

21°C

30°C

1 h

34

58

56

70

2 h

58

80

78

90

3 h

71

99

99

99

3.5h

84

99

99

99

影响天然TEV酶活性的常见因素:1PMSFAEBSF1 mM),TLCK1 mM),Bestatin1 mg/ml)、Pestatin A1 mM),EDTA1 mM)以及E-643 mg/ml),以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响;2Zn离子(>5 mM)对rTEV活性有抑制;3)与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。

rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

产品性质

来源(Source

大肠杆菌

外观(Appearance

无色透明液体

比活力(Specific Activity

5 U/μl

活性定义(Unit Definition

1×rTEV Buffer50 mM TrispH8.00.5 mM EDTA1mM DTT)中,30反应1h,剪切>85%3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

纯化(Purification 

Ni亲和纯化

纯度(Purity

≥95%by SDS-PAGE

产品组分

编号

组分名称

规格

1000U

10×1000U

10KU

50KU

20403-A

rTEV Protease5 U/μl

200 μl

200 μl×10

2ml

10ml

20403-B

rTEV Buffer 120×

2 ml

2 ml×10

20ml

100ml

20403-C

rTEV Buffer 21000×

50μl

50μl×10

500μl

2.5ml

运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。

收到产品后,请将rTEV Buffer 1rTEV Buffer 2置于-20 ºC保存,一年稳定。对于rTEV Protease,短期使用,可置于-20 ºC保存,6个月稳定;长期使用,请置于-70保存,一年稳定。强烈建议收到货或者*次使用时将各组分分装保存,特别是rTEV Protease,以及rTEV Buffer 21000×),避免反复冻融。

应用实例

  • EP管中配制如下反应体系,

融合蛋白

20 μg

rTEV Protease (5 U/μl)

2-4μl

rTEV buffer 120×

7.5 μl

rTEV Buffer 2100×*

1.5μl

DDW(超纯水)

up to 150 μl

*取适量的rTEV Buffer 21000×10倍稀释到rTEV Buffer 2100×),再根据以上体系加量。

2. 30孵育,在1246小时分别吸出30 μl上述反应液,置于单独的EP管中。

3. 向上述EP管中加入30 μl 2×SDS Loading Buffer,置于-20

4. 样品全部反应完毕后,样品煮沸5 min,取40 μl进行SDS-PAGE分析。确定*反应时间。如融合蛋白要求低温处理,可将反应液置于4,请延长反应时间,并增加rTEV酶用量。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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