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重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有的位点特异性，rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶
产品型号：厂商性质：其他更新时间：2024-10-21访 问 量：1122
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产品仅供科研使用，不能用于食用和医疗等
rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶
产品描述
重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30°C时可达到*活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30°C的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
反应时间 | 不同温度下剪切活性(%) | |||
4°C | 16°C | 21°C | 30°C | |
1 h | 34 | 58 | 56 | 70 |
2 h | 58 | 80 | 78 | 90 |
3 h | 71 | 99 | 99 | 99 |
3.5h | 84 | 99 | 99 | 99 |
影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响；2）Zn离子（＞5 mM）对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。
rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶
产品性质
来源（Source） | 大肠杆菌 |
外观（Appearance） | 无色透明液体 |
比活力（Specific Activity） | 5 U/μl |
活性定义（Unit Definition） | 在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH8.0，0.5 mM EDTA，1mM DTT）中，30℃反应1h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。 |
纯化（Purification ） | Ni亲和纯化 |
纯度（Purity） | ≥95%（by SDS-PAGE） |
产品组分
编号 | 组分名称 | 规格 | |||
1000U | 10×1000U | 10KU | 50KU | ||
20403-A | rTEV Protease（5 U/μl） | 200 μl | 200 μl×10 | 2ml | 10ml |
20403-B | rTEV Buffer 1（20×） | 2 ml | 2 ml×10 | 20ml | 100ml |
20403-C | rTEV Buffer 2（1000×） | 50μl | 50μl×10 | 500μl | 2.5ml |
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。
收到产品后，请将rTEV Buffer 1、rTEV Buffer 2置于-20 ºC保存，一年稳定。对于rTEV Protease，短期使用，可置于-20 ºC保存，6个月稳定；长期使用，请置于-70℃保存，一年稳定。强烈建议收到货或者*次使用时将各组分分装保存，特别是rTEV Protease，以及rTEV Buffer 2（1000×），避免反复冻融。
应用实例
融合蛋白 | 20 μg |
rTEV Protease (5 U/μl) | 2-4μl |
rTEV buffer 1（20×） | 7.5 μl |
rTEV Buffer 2（100×）* | 1.5μl |
DDW（超纯水） | up to 150 μl |
【*】：取适量的rTEV Buffer 2（1000×）做10倍稀释到rTEV Buffer 2（100×），再根据以上体系加量。
2. 30℃孵育，在1、2、4、6小时分别吸出30 μl上述反应液，置于单独的EP管中。
3. 向上述EP管中加入30 μl 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
4. 样品全部反应完毕后，样品煮沸5 min，取40 μl进行SDS-PAGE分析。确定*反应时间。如融合蛋白要求低温处理，可将反应液置于4℃，请延长反应时间，并增加rTEV酶用量。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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