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蛋白AG融合蛋白琼脂糖凝胶

蛋白AG融合蛋白琼脂糖凝胶
英文名称:Protein AG-Berpharose FF
货号:B2834
规格:1ml
本产品仅供科研实验用,不做其它用途!

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-08-28
  • 访  问  量:326
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详细介绍

蛋白AG融合蛋白琼脂糖凝胶


英文名称:Protein AG-Berpharose FF


货号:B2834


规格:1ml


产品介绍

蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。同单独的蛋白A或蛋白G分离介质相比,具有更宽广的结合范围,同时融合后的r-PAG降低了对pH值的依赖,允许在pH5-8进行结合。本产品多用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究,及抗体固定及其它相关研究。


规格

1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、25ml、100ml、500ml 纯化流程


以免疫共沉淀(Co-IP)举例:


结合缓冲液:20mM磷酸缓冲液、150mMNaCl、pH7.0


洗脱缓冲液:0.1M甘-氨酸,PH3.0


中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 8.5


(注:所用过柱液体在使用之前建议用至少小于等于0.45μm滤膜过滤)


(1)样品预处理:细胞、植物、动物组织裂解液样品,最终总蛋白浓度选择在0.5-1.0ug/ul范围内为宜,上样前要确保样品溶液拥有合适的离子强度和pH值(如:可以用结合缓冲液对样品液进行稀释或透析);哺乳动物细胞内有多种成分可以和IgG发生结合,可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带,可通过加入Normal IgG和Protein AG-Berpharose FF的方式预处理裂解液样品,以降低非特异性结合。


(2)抗原-抗体复合物制备:将抗体与含有目的蛋白的裂解液混合,室温震荡孵育30-60min(或4-8度孵育过夜),形成抗原-抗体复合物(可根据已优化好的抗原抗体结合条件处理)。


(注意:抗体的加入量要依据填料量,抗体的加入量过多会影响到抗原-抗体混合物与填料的结合,故建议抗体加入量为填料载量的80%)


(3)填料平衡:取适量的Protein AG Berpharose FF加入到2ml离心管中,500 r离心1min,弃上清,加入0.5ml结合缓冲液,悬浮填料,500 r离心1min,弃上清,重复两次。


(4)抗原-抗体复合物的吸附:将抗原-抗体复合物加入到平衡好的填料中,均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,促使样品和填料充分接触并吸附,约30min后,500 r离心1min,取上清液,留样检测。


(5)除杂清洗:向上述离心管中加入0.5ml的结合缓冲液,悬浮填料,进行清洗,500 r离心1min,吸弃上清,重复两次。


(6)抗原洗脱:


①非变性洗脱法(洗脱的样品保持原有的生物活性,可用于后期功能分析):向离心管中加入5倍柱体积的洗脱缓冲液,用移液器吹打5次,混匀,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管10min后,500 r离心1min,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标抗原,收集上清液至新的离心管中,并立即加入十分之一体积的中和缓冲液中和缓冲液调节其pH至中性,用于后期功能分析。


     ②变性洗脱法(洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测):向离心管中加入25ul  1×SDS-PAGE Loading Buffer混合均        匀,95℃加热5min。然后进行离心,200 r离心1min,收集上清液,进行SDS-PAGE电泳,转膜后进行 Western分析。


蛋白AG融合蛋白琼脂糖凝胶


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