热门搜索: 1%豚鼠红细胞 2%鸡红细胞 1%鸡红细胞 重组人线粒体核糖体蛋白S2(MRPS2) 重组人蛋白酶体激活物亚基1(PSME1)蛋白 重组人肝癌衍生生长因子相关蛋白3 重组人FAM83A蛋白 重组人ER膜蛋白复合物亚基8蛋白(COX4NB) 重组人Rogdi蛋白同系物蛋白 重组人 MAD2L1结合蛋白(MAD2L1BP) 重组人精-氨酸/丝-氨酸蛋白17A蛋白 重组人含brix结构域蛋白1(BXDC1)蛋白 重组人CCR4-NOT转录复合物,亚基8蛋白 重组人RND3蛋白 重组人真核翻译起始因子1A,X-连接蛋白 重组人纤溶酶原激活物抑制剂2 蛋白

产品展示/ Product display

您的位置:首页  /  产品展示  /  试剂  /    /  镍琼脂糖凝胶

镍琼脂糖凝胶

镍琼脂糖凝胶
英文名称:Ni-Berpharose FF
货号:B2824
规格:1ml
本产品仅供科研实验用,不做其它用途!

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-08-28
  • 访  问  量:230
立即咨询

联系电话:13764793648

详细介绍

镍琼脂糖凝胶


英文名称:Ni-Berpharose FF


货号:B2824


规格:1ml


1.      产品介绍


镍-琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球为基质,活化偶联亚氨基二乙酸(IDA),之后螯合Ni2+。IDA是金属螯合层析中最-常用的配体,和次氮基三乙酸(NTA)相比,IDA具有亲和力强、载量高、可再生重复使用等优点。


镍-琼脂糖凝胶FF主要用于纯化含有组-氨酸标签(His-Tag)的重组蛋白。组-氨酸标签中的咪唑环同过渡金属Ni2+形成稳定的配位键,能特异、牢固和可逆地吸附在固定有Ni2+的基质上,可通过增加咪唑浓度对重组蛋白进行竞争洗脱。


2.规格


1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、20ml、100ml、500ml 纯化流程


①平衡


镍-琼脂糖凝胶FF柱用2~5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。


建议流速为100 cm/h。


②上样


(1)样品一般溶解于pH6~8的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。


(2)缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐,同时最好避免巯基乙醇、DTT等还原剂。


(3)常用缓冲液有10~100 mM磷酸钠缓冲液、20~200 mM Tris-HCl缓冲液等。


(4)缓冲液中一般要加入0.15~0.5 M的NaCl以消除离子交换作用。


(5)初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时,推荐使用50 mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5 M NaCl,pH 7.4)作为初始缓冲液。


③洗脱


(1)增加咪唑浓度进行洗脱是镍-琼脂糖凝胶FF最-常用的洗脱方法。


(2)咪唑为碱性,相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。


(3)初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时,如不确定洗脱需要的咪唑浓度,推荐在初始缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑,浓度从低


到高分别洗脱和收集重组蛋白,之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。


(4)有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。


 


洗脱方法


(1)降低pH洗脱:大多数蛋白在pH6~4会被洗脱下来(也可以在pH 3~4),缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。


(2)竞争性洗脱:线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度(如0~0.5M咪唑、0~50 mM组-氨酸、0~2M NH4Cl)。梯度洗脱最好在起始缓冲液的恒定pH值下进行。


(3)螯合剂洗脱:EDTA、EGTA等螯合剂可同金属离子产生作用力,导致蛋白被洗脱下来。此法不能分离不同的蛋白,还会影响蛋白的吸附,导致融合蛋白无法挂柱。


注:降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使得金属离子脱落,下次使用前需要重新螯和金属离子。最-常用的方法为竞争性洗脱。


上述洗脱方法,均须在缓冲液中加入150 ~500mM的NaCl以消除离子交换作用。


 


5.再生、清洗、保存


①凝胶再生


(1)多次使用后或需要更换螯合的金属离子时,必须将凝胶脱镍再生。脱镍方法:用5~10个柱体积的蒸馏水淋洗柱子,再用5~10个柱体积的100 mM EDTA淋洗柱子,最后用2~3个柱体积的0.5 M NaCl洗掉残留的EDTA。


(2)多次使用的柱子脱镍后一般需要进行清洗。清洗方法:用0.1~1.0 M NaOH反向清洗柱子,50 cm/h保持1~2 h,能去除结合强的杂质,同时也能去除热源。


(3)清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法:用2~5个柱体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子,用0.1~0.3 M金属盐溶液过柱5~10个柱体积以螯合金属离子,之后用5~10个柱体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。


②在位清洗


(1)去除因离子交换作用吸附的蛋白:2~3个柱体积的2 M NaCl溶液反向清洗。


(2)去除强疏水性蛋白和脂质等:4个柱体积的70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗。


(3)除去蛋白沉淀、疏水性蛋白:参照凝胶再生步骤。



6.注意事项:


1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。


2)本产品保存条件为20%乙醇,4~8℃。


3) 2-25℃,常压,避光运输


4)仅供科研实验使用


镍琼脂糖凝胶

留言询价

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
微信扫一扫

邮箱:1170233632@qq.com

传真:021-51870610

地址:上海市顾戴路2988号B幢7楼

Copyright © 2024 上海信帆生物科技有限公司版权所有   备案号:沪ICP备13019554号-1    技术支持:化工仪器网

TEL:13764793648

扫码加微信