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伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶
英文名称:Con A Berpharose
货号:B2781
规格:5ml
1.产品介绍
伴刀豆球蛋白A-琼脂糖凝胶是一种将伴刀豆球蛋白A(Con A)与键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质。Con A是从巨豆中分离出来的一种植物血凝素,能与含有ɑ-D-吡喃甘露糖基、ɑ-D-吡喃葡萄糖基以及与其空间位置相关的分子基团的结合。Con A与糖类分子结合主要在C-3、C-4及C-6的羟基部分,Con A与D-吡喃甘露糖的结合比与D-吡喃葡萄糖要强些,主要用于分离和纯化一些糖蛋白、膜蛋白、糖脂、多糖、带甘露糖苷或葡糖苷残基的膜囊泡、lgM、激素脂蛋白等,例如人血清中胰蛋-白酶抑制剂、碱性磷酸酯酶、小牛脾磷酸二酯酶、不同变种的甲胎球蛋白和某些激素如绒毛膜促性-腺激素(HCG)、促黄体激素(LH)等物质都可以用它纯化。
2.规格
1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、20ml、100ml、500ml、1L 纯化流程
应用举例:
平衡缓冲液:20mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1mM CaCl2、1mM MnCl2、pH7.4
结合缓冲液:20mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1mM CaCl2、1mM MnCl2、pH7.4
(该填料如需在 pH 小于5.0下操作,必须Mn2+和Ca2+的存在时才具有吸附活性)
洗脱缓冲液: 20mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1mM CaCl2、1mM MnCl2、0.1M-0.2Mɑ-D-甲
基甘露糖苷(或ɑ-D-甲基葡萄糖苷)、pH7.4
(注:洗脱液中ɑ-D-甲基甘露糖苷或ɑ-D-甲基葡萄糖苷浓度可根据物质吸附能力进行线性或梯度洗脱。甘露糖和葡萄糖亦可以做洗脱物质,但洗脱能力较弱。结合能力较强的物质可采用降低洗脱液pH洗脱,但不要低于pH4.0。可采用硼酸盐作为洗脱液,如0.1M硼酸盐,pH6.5。)
平衡:用3-5个柱体积的平衡缓冲溶液进行平衡,观察检测器的变化,直到电导率、
pH值等参数不变。
上样:样品的预处理,样品需至少用0.45μm滤膜过滤,在上样,以免堵塞层析柱。
上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,也可通过线性实验找到最佳
上样量。
淋洗:用5-10个柱体积的平衡缓冲液进行淋洗,观察检测器的变化,直到电导率、pH
值等参数基本不变。
(4)洗脱:使用 5-10 倍柱体积的洗脱液,收集洗脱峰(部分洗脱方式需中和液中和)。
(5)清洗保存:依次使用 3 倍柱体积的平衡缓冲液液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料,然后保存在等体积的20%乙醇中,置于 4-8 ℃保存。
5.在位清洗(CIP):
填料可以重复使用无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
用 3-4 倍柱体积的含有0.5M NaCl的pH8.5或pH4.5的缓冲液清洗,然后立即用5倍柱体积的结合液平衡。
去除结合力较强物质:用 2 倍柱体积的含1% Triton X-100,pH6.5的0.1M硼酸盐缓冲液清洗,或20%乙醇或50%乙二醇溶液清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH 7.4清洗。
6.注意事项:
(1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。
(2)本产品保存条件为20%乙醇,4-8℃。
(3)运输:4-25℃,常,,避光。
(4)仅供科研实验使用。
伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶