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HE染色实验代测

HE染色实验代测

简要描述:

HE染色实验代测
服务项目:包埋→切片→HE染色→拍照→全景扫描→HE分析
样本运输要求:常温运输(4%多聚甲醛固定,可加冰袋运输)
信帆生物提供各类实验代测服务,更多服务项目欢迎致电咨询,我们将竭诚为您服务!

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HE染色实验代测

苏木精-伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

HE染色使用说明:

1、细胞可做HE染色,贴壁细胞做爬片后染色,悬浮细胞做滴片后染色。

2、拍照倍数分100倍,200倍,400倍。正常情况下拍照是200倍3张,400倍3张。

3、全景扫描可看任意倍数。

HE染色实验步骤

1、样本组织固定与切片:首先将组织样本进行常规的石蜡包埋。在模具中加入液态石蜡,将待包埋的组织样本放入石蜡中,确保组织位置规整。补充少许液态的石蜡后,进行降温冷冻,使石蜡变为固态达到组织固定的效果,然后使用石蜡切片机进行切片,厚度在4-8um左右。将切完后的组织切片放入载玻片上使用40℃温水浸泡使组织充分伸展。

2、组织样本脱蜡:将待测组织样本切片放于二甲苯中,充分浸泡10min,浸泡完后更换二甲苯继续浸泡10min,目的是使用二甲苯将切片中的石蜡溶解,这样可以在进行染液染色的时候,染液可以充分进入组织种,同时,二甲苯还可以起到透明的作用,使切片更容易观察。

3、组织样本水化:将浸泡过二甲苯的待测组织样本先放入无水乙醇中浸泡5min,使脱蜡时用的二甲苯可以被洗脱出去,使水可以进入组织中;再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡5min以达到充分水化的效果。

4、组织切片苏木-素染色、分化与反蓝:将水化后的组织样本的切片使用PBS溶液浸泡清洗,每次浸泡5min,总共清洗3次。之后用移液枪吸取已经预先配制好的苏木-素染色液,每个组织切片滴加100ul,充分染色10min。染色完毕后使用蒸馏水洗去多余的苏木-素染色液。然后再使用1%的盐酸乙醇进行分化,使细胞核中结合过多的染液和细胞浆中的多余的染液被除去。分化完成后,再用双蒸水将组织切片冲洗干净。为了使苏木-素染蓝色,使用弱碱性的促蓝液加入组织切片中,让细胞核染蓝色。反蓝结束后先用清水进行清洗,再用双蒸水将组织切片冲洗干净。

5、组织切片伊红染色与脱水:向上一步驟的组织样本切片中加入伊红染液,并使组织可以充分染色3min,染色完毕后,再将组织切片进行梯度脱水,分别使用浓度为80%、95%以及无水乙醇进行操作。80%的乙醇脱水5s,95%乙醇脱水2min,无水乙醇脱水2min。

6、组织样本切片风干封片:将脱水后的组织样本切片使用二甲苯浸泡2次,每次持续4min,然后将组织样本切片干,并使用中性树胶封片。

7、最后在显微镜下观察并拍照。

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