HE染色实验代测

HE染色实验代测

苏木精-伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

HE染色使用说明:

1、细胞可做HE染色，贴壁细胞做爬片后染色，悬浮细胞做滴片后染色。

2、拍照倍数分100倍，200倍，400倍。正常情况下拍照是200倍3张，400倍3张。

3、全景扫描可看任意倍数。

HE染色实验步骤

1、样本组织固定与切片：首先将组织样本进行常规的石蜡包埋。在模具中加入液态石蜡，将待包埋的组织样本放入石蜡中，确保组织位置规整。补充少许液态的石蜡后，进行降温冷冻，使石蜡变为固态达到组织固定的效果，然后使用石蜡切片机进行切片，厚度在４-８um左右。将切完后的组织切片放入载玻片上使用40℃温水浸泡使组织充分伸展。

2、组织样本脱蜡：将待测组织样本切片放于二甲苯中，充分浸泡10min，浸泡完后更换二甲苯继续浸泡10min，目的是使用二甲苯将切片中的石蜡溶解，这样可以在进行染液染色的时候，染液可以充分进入组织种，同时，二甲苯还可以起到透明的作用，使切片更容易观察。

3、组织样本水化：将浸泡过二甲苯的待测组织样本先放入无水乙醇中浸泡5min，使脱蜡时用的二甲苯可以被洗脱出去，使水可以进入组织中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡５min以达到充分水化的效果。

4、组织切片苏木-素染色、分化与反蓝：将水化后的组织样本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡５min，总共清洗３次。之后用移液枪吸取已经预先配制好的苏木-素染色液，每个组织切片滴加100ul，充分染色10min。染色完毕后使用蒸馏水洗去多余的苏木-素染色液。然后再使用1%的盐酸乙醇进行分化，使细胞核中结合过多的染液和细胞浆中的多余的染液被除去。分化完成后，再用双蒸水将组织切片冲洗干净。为了使苏木-素染蓝色，使用弱碱性的促蓝液加入组织切片中，让细胞核染蓝色。反蓝结束后先用清水进行清洗，再用双蒸水将组织切片冲洗干净。

5、组织切片伊红染色与脱水：向上一步驟的组织样本切片中加入伊红染液，并使组织可以充分染色3min，染色完毕后，再将组织切片进行梯度脱水，分别使用浓度为80%、95%以及无水乙醇进行操作。80%的乙醇脱水5s，95%乙醇脱水2min，无水乙醇脱水2min。

6、组织样本切片风干封片：将脱水后的组织样本切片使用二甲苯浸泡２次，每次持续４min，然后将组织样本切片干，并使用中性树胶封片。

7、最后在显微镜下观察并拍照。

HE染色实验代测