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细胞样本中甘油含量检测试剂盒

细胞样本中甘油含量检测试剂盒

简要描述:

细胞样本中甘油含量检测试剂盒,甘油是甘油三酯的水解产物。与游离脂肪酸一样,甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标,但检测更加方便。本试剂盒采用优化步骤,能够检测实体组织、细胞中的甘油含量,线性范围为10-1200µmol/L。

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 细胞样本中甘油含量检测试剂盒


适用范围:测定实体组织、细胞中的甘油浓度。组成 (105 次微板测定或 30 次 1 ml 比色杯测定):

(1) 裂解液 50 ml 

(2) R1 试剂 16 ml

(3) R2 试剂 4 ml 

(4) 4 mmol/L 甘油标准品 1 ml

4 ºC,储存 3 月。

所需设备:酶标仪、生化分析仪或 721、722 型可

见光分光光度计。佳工作波长 550nm,如无此波

长建议优先选用 570nm、次选 530、490nm。


一 组织细胞裂解 

细胞(包括分化的脂肪细胞)裂解: 消化、离心收集细胞。或直接在培养皿内裂解。通常6孔板单孔约2x106个细胞,75cm2瓶约1x107细胞。按比例每 1~2 x 106细胞加 0.1ml 裂解液,混匀,静置 10 分钟。


动物组织裂解:

切记要预先将新鲜组织切称重后再进行保存。组织冻存后再进行解冻、剪切、称重可能会产生严重的测量误差。离心管精确称重,加入组织块后再称重,二者相减(即减量称重法)计算组织量(约 100mg)。强烈建议按比例每 1mg 组织加10µl裂解液以减少样品间蛋白和脂质含量变异而产生的误差。(注意;裂解液用量在 1ml 或更多可保证有效的裂解与脂质提取)。用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器破碎组织。(不推荐超声方法,因其不能完全和均匀破碎。应根据预实验调整初始的组织细胞加入量),而后,静置 10 分钟。

 

二. 裂解液处理: 

1. 取适量上清液转移到 1.5ml 离心管中,进行步骤

2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量试剂盒进行蛋白定量或-20ºC 储存。

2. 70ºC 加热 10 分钟灭活脂肪酶,可能出现絮状沉淀。

3. 室温 5000rpm 离心 5 分钟,上层清液即可用于酶学测定。

 

三 工作溶液配制:按 4:1 比例,取 4 ml 试剂 R1 与1 ml 试剂 R2 混合即可,立即使用或 4ºC 保存<1 天,变色弃去。(注意:谨防来源不明但容易发生的甘油污染,可来自操作者本人或标准品液体微粒溅射等。)

 

 细胞样本中甘油含量检测试剂盒

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