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Western blot实验代测,WB实验操作注意事项

Western blot实验代测,WB实验操作注意事项

简要描述:

Western blot实验代测,WB实验操作注意事项,免疫印迹(immunblotting)又称蛋白质印迹(western blot),他是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。

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Western blot实验代测,WB实验操作注意事项

免疫印迹(immunblotting)又称蛋白质印迹(western blot),他是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有

SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现在已成为蛋白分选的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分选。



客户需新鲜或正确保存的蛋白样品, 检测目的蛋白的一抗(常规指标本公司提供一抗)。样品要求为:

1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。

2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml

3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml
 

Western blot结果及数据提供

内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张,可提供扫描图,实验报告,包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务,将提供检测报告

Western blot实验服务

服务内容

我们提供从蛋白制备、蛋白电泳到Western blot检测的全流程服务,如需要还可进行灰度分析。

说明

1、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织)作为阳性对照。

2、每张膜检测1-8个样品。

3、如果一抗由客户提供,请在正确条件下保存,避免污染及反复冻融。

western blot (WB)服务须知: 
1. 样本要求尽可能新鲜;
2. 样本量:组织样本,质量大于100mg;细胞样本,细胞数大于1×106
3. 您可自备一抗,也可让我公司代买。为保证质量,抗体醉好为进口单克隆抗体;
4. 服务时限和内容:收到样本之日起2-3周内提交实验结果,具体包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、图片及相关分析数据等;
5. 报告提供:实验结果将以电子或书面形式提交给您。

Western blot的原理 
   Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

   以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

Western blot实验代测,WB实验操作注意事项

为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不*?

这个问题很多老师在做western blotting的时候遇见过,内参*,而目的条带每次都不一样,原因可能是在显影液环节,简单来说就是你的膜没有淋干净,上面残留参差不齐的T/TBS,T/TBS能稀释显影液,目的条带本来表达量就少,某一个点残留的T/TBS稍微多一点就可能导致显影效果下降,所以建议在显影液反应前,尽量将膜上的洗膜液淋掉(当然也不能让膜干了,要是实验室富裕的话,也可以多添点显影液,效果一样)。

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