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TUNEL检测

TUNEL检测

简要描述:

TUNLE即原位末端转移酶标记技术。凋亡细胞的DNA双链断裂或一条链出现缺口,产生一系列3′-OH末端,在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)作用下,将脱氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物标记到DNA的3′末端,从而进行凋亡细胞的检测。TUNEL是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞凋亡测定,并可检测出极少量的凋亡细胞,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高,因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。

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TUNEL检测的原理: 

胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bpDNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

TUNEL检测(石蜡切片)

取下适当的新鲜的组织块固定于4%-10%浓度的多聚甲醛或中性甲醛中,甲醛与组织块体积比在10:120:1之间,4摄氏度保存运输;

TUNEL检测(冰冻切片)

取下的新鲜组织应立即放入超低温冰箱或者液氮中,用干冰运输,固定好的切片应于-80或者-20度保存,并尽快用于检测;

TUNEL检测(细胞爬片)

细胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min,换PBS缓冲液4度保存运输,尽快用于检测;

 

荧光法需要先拍一张凋亡荧光图,再拍一张原位染核图,再合并图层,最终我们提供的为三张荧光图片。

 

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