骨组织ALP+TRAP双重染色

骨组织ALP+TRAP双重染色

服务介绍：

骨组织使用碱性磷酸酶（ALP）进行染色可明确成骨细胞的成骨潜能，使用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色可明确破骨细胞的骨吸收能力。通过对这两种特异性标志酶（ALP/TRAP）的同时检出，可以分析骨相关细胞的分化及骨组织的生长情况。

实验采用偶氮偶联法来显示碱性磷酸酶（ALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸酯水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色（蓝色）产物，以此证明碱性磷酸酶（ALP）的定位。在酸性条件下，酸性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸酯水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色（红色）产物，以此证明抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的定位。ALP蓝色阳性信号和TRAP红色阳性信号，红蓝色对比鲜明，可清楚同时显示成骨细胞与破骨细胞的分布及含量的变化。

实验大体流程：

骨组织PFA 4℃固定保存一周内（24h-48h最佳）——骨组织用我司EDTA脱钙液4℃低温脱钙——脱水浸蜡包埋石蜡切片——石蜡切片脱蜡至水——提前配制过滤的ALP染色液染色——水洗——提前配制过滤的TRAP染色液染色——烘箱烤片——中性树胶封片。

结果判读：

骨组织沿骨膜内整齐排列的矮柱状成骨细胞呈蓝色，软骨处和骨小梁边缘呈蓝色，破骨细胞呈酒红色或者浅红色，细胞核呈绿色。

送样运输要求：

1、做骨组织ALP+TRAP双重染色需要用PFA 4℃固定保存运输，固定一周内脱水包埋切片染色。室温固定数小时就会影响酶活，4℃固定超过一周也会影响酶活，导致阳性减弱甚至丢失。

2、染ALP+TRAP双重染色的骨组织需要使用我司EDTA脱钙液4℃低温脱钙。其他脱钙液脱钙的组织，不保证染色结果。用酸性脱钙液脱钙的骨组织，酶失活阳性丢失。建议在我司进行骨组织的全套脱钙制片和染色。

3、不脱钙骨组织前期样本制片处理方式对ALP酶活影响较大，不脱钙骨组织切片和切磨片目前不建议做此染色。