ALP碱性磷酸酶染色（偶氮偶联法）

ALP碱性磷酸酶染色（偶氮偶联法）

服务介绍：

碱性磷酸酶是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同工酶。已发现有 ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5与 ALP6六种同工酶。其中第1、 2、6 种均来自肝脏，第3种来自骨细胞，第4种产生于胎盘及癌细胞，而第5种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。正常的骨代谢是通过成骨细胞生长与破骨细胞建立骨吸收而维持平衡。成骨细胞的标记酶是碱性磷酸酶（ALP），酶活性的变化是成骨细胞生理现象的重要标志。在骨代谢研究领域被用作骨形成重要指标之一。

本实验采用偶氮偶联法来显示碱性磷酸酶活性，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色（蓝色）产物，以此证明酶的定位。

实验大体流程：

骨组织PFA4℃固定保存一周内（24h-48h最佳）——骨组织用我司EDTA脱钙液4℃低温脱钙——脱水浸蜡包埋石蜡切片——石蜡切片脱蜡至水——提前配制过滤的ALP染色液染色——烘箱烤片——中性树胶封片。

结果判读：

骨组织沿骨膜内整齐排列的矮柱状成骨细胞呈蓝色，软骨处呈蓝色，骨小梁边缘呈蓝色，细胞核呈红色。

其他软组织含碱性磷酸酶的细胞呈蓝色，细胞核呈红色。

送样运输要求：

1、做ALP染色的组织需要用PFA 4℃固定保存运输，固定一周内脱水包埋切片染色。室温固定数小时就会影响酶活，4℃固定超过一周也会影响酶活，导致阳性减弱甚至丢失。

2、染ALP的骨组织需要使用我司EDTA脱钙液4℃低温脱钙。其他脱钙液脱钙的组织，不保证染色结果。用酸性脱钙液脱钙的骨组织，酶失活阳性丢失。建议在我司进行骨组织的全套脱钙制片和染色。

3、不脱钙骨组织前期样本制片处理方式对ALP酶活影响较大，不脱钙骨组织切片和切磨片目前不建议做此染色。

ALP碱性磷酸酶染色（偶氮偶联法）