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ST2单克隆 包被抗体

ST2单克隆 包被抗体

简要描述:

ST2单克隆 包被抗体
ST2有两种主要的亚型:①跨膜型ST2(ST2L),具有跨膜结构,含有跨膜片段和Toll/IL-1TR受体胞内结构域;②可溶型ST2(sST2),无跨膜结构,可分泌到细胞外。

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目前使用抗体的实验方法有很多,不同的使用方法过程中,因为对蛋白样品的处理方式不一样,蛋白的含量有差异,对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的,可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息,选择尽可能有效果的抗体。

 一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗,比如 WB、IHC 等,都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验,可能就会使用到直接标记的一抗,比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围,针对不通的参数要求选择对应的标记物。在免疫荧光双标实验中,需要选配不同的荧光标记物。有人认为单抗比多抗好,其实这并不是一个严谨的观点,只能说在可能性上单抗的特异性更好一些,而多抗的亲和力会优于单抗,并且特异性并不一定就逊于单抗,主要看抗原的设计水平。目前商品化抗体里单抗主要是鼠单抗、兔单抗,多抗主要是兔多抗、山羊多抗等,其他种属来源抗体较少。不建议纠结于单抗好还是多抗好,能做出实验的抗体就是好抗体。

在选择上一般建议实验种属和抗体种属亲缘性越远越好,不宜同源。抗体不同种属会要影响接下来二抗的选配。特别是在免疫荧光双标实验中,需要在区别于实验种属的基础上,区分开两个指标的抗体种属来源,以便于二抗区别识别。

抗体选择与使用过程中,多少还会遇到一些意想不到的事情。有些细节,还是需要多注意一些。如在选择做阻断或中和实验时,有时需要将抗体加到细胞培养液中,这是需要注意抗体是否含有叠氮钠。如果是大包装的抗体,进行分装是比较节约的方式,如果是高效价的,可以配成母液再分装。抗体的短时间运输,用普通冰块保持温度是可以满足要求的。

另外不要纠结于 WB 过程中分子量的问题。很多时候,我们看到同样的抗体,不同的品牌,甚至同一品牌不同的货号,标注的分子量都不一样。其实可能只是生产商只检测时使用了不同的种属不同的样品类型,或是参照了不同的文献,对使用者来说,同样的样品,不管使用哪个品牌的,只要抗体是对的,目的条带只会出现在相同的位置。关于分子量的问题,一般不建议看产品说明,WB 中条带的位置由样品决定,并不会因为抗体不同而不同。所以在检测蛋白之前,我们可以通过数据库或参考文献,对将要检测的蛋白做个比较全面的了解,包括其可能剪切与修饰的情况、表型的情况等。在第一次使用一个新的抗体时,不要根据分子量横向剪膜,可以保留几个全泳道,看看条带位置或分布的情况。

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