miRNA QPCR检测

miRNA QPCR检测

服务介绍：

荧光定量PCR是通过荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。可以用于检测miRNA的基因表达水平。

　实验流程：

取材-RNA提取逆转录成cDNA-miRNA引物设计合成-QPCR扩增-数据分析-发报告

miRNA采取特异性逆转录，默认采用茎环法，如需使用加尾法请提前告知。

送样运输要求：

1. 样品处理

a) 动物组织：常规组织100mg，脂肪组织，结缔组织，纤维化组织适当增加。将组-织剪切成合适大小后（建议组织块长宽高均不大于0.5 cm），然后迅速完-全浸泡于5～10倍体积的RNAsolidTM试剂中。（注意：已浸入RNAsolidTM试剂中的组织经平衡一段时间后，可从溶液中取出，切成更小的组织块，再重新放回RNAsolidTM试剂中；有些比较弱的液体渗透性组织如骨头等，不适合用RNAsolidTM试剂进行RNA保护。）

b) 植物组织：新鲜的叶、果肉、种子等最少100 mg。将嫩叶，嫩茎组织切成合适的大小（建议长宽高均不大于0.5 cm）后，然后迅速完-全浸泡于5～10倍体积的RNAsolidTM试剂中。（注意：某些植物组织天生具有的屏障，如叶子表面的蜡层可阻碍RNAsolidTM试剂的渗透，对于此类组织，通常需破坏这些屏障层以允许溶液的浸透。）

c) 细胞等样本：收集不少于10^6个细胞沉淀（用PBS清洗1-2次），干冰运输。

d) 酵母、细菌等样本：离心弃上清，收集一定量的菌体沉淀，干冰运输。

e)全血：最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管，干冰运输。

f)血清或血浆：最少1 mL，干冰运输。

g) RNA样品： OD260/280为1.8-2.0，浓度≥100 ng/μL，体积≥20μL，干冰运输。

h)cDNA（必须能检测miRNA基因）：cDNA原液≥20 μL，干冰运输。 

2. 样品保存及运输

加入有RNAsolidTM试剂的样本可在37℃保存1～2天，2天以后部分组织中的RNA会开始降解。室温（25℃）稳定保存1周，不会有明显的RNA降解发生。大部分样品置于RNAsolidTM试剂中，4℃条件下可稳定保存1个月，不会有明显的RNA降解发生。长期存放可先将保存在RNAsolidTM试剂中的样本4℃浸透过夜，然后将RNAsolidTM试剂吸出弃去，再将样本放入-20℃或-80℃长期稳定保存3～5年。