甲基化检测BSP

甲基化检测BSP

服务介绍：

亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是检测基因甲基化的经典方法，其原理为：用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿-嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶则不变。随后设计BSP引物进行PCR，在扩增过程中尿-嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。最后，将PCR产物克隆至载体后进行测序，测序结果与未经处理的序列比较，分析CpG位点是否发生甲基化，这种方法称为BSP-克隆测序法。此方法精确度高，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。一般选取10个克隆子的测序结果进行数据分析。

　　实验流程：

取材-提取基因组DNA-亚硫酸氢盐处理-纯化DNA-BSP引物合成-PCR扩增-TA克隆-测序-发报告

送样运输要求：

动物组织：新鲜的组织量100 mg(黄豆大小)，最少50 mg（绿豆大小），脂肪组织、结缔组织、纤维化组织适当增加。干冰运输。

植物组织：新鲜的叶、果肉、种子等最少需100 mg。干冰运输。

细胞：1×10^6个细胞，收集细胞沉淀，干冰运输。

全血：最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管，-20度运输。

DNA：体积≥50 uL，浓度≥ 50 ng/uL，干冰运输。

注：植物样本的甲基化实验需要客户提供具体的启动子序列信息。