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链霉亲和素的突变体-琼脂糖凝胶Strep-Tactin 2 NUPharose FF是链霉亲和素的突变体（Strep-Tactin2配基）和琼脂糖凝胶偶联形成的和层析分离介质，用于分离、纯化StrepII或Twin Strep标签蛋白。Strep II标签为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），一般不影响融合后蛋白质的结构和功能，常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。
产品型号：厂商性质：生产厂家更新时间：2024-10-13访 问 量：1000
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链霉亲和素的突变体-琼脂糖凝胶
1 、产品介绍
Strep-Tactin 2 NUPharose FF是链霉亲和素的突变体（Strep-Tactin2配基）和琼脂糖凝胶偶联形成的和层析分离介质，用于分离、纯化StrepII或Twin Strep标签蛋白。Strep II标签为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），一般不影响融合后蛋白质的结构和功能，常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。Twin Strep标签为两个StrepII串联的标签，相比Strep II标签，Twin Strep标签与Strep-Tactin 2配基的亲和力更高。
本产品的Strep-Tactin 2配基与上一代Strep-Tactin 配基相比，对Strep II标签的亲和力进一步提高，与生物-素的亲和力大幅削弱。因而本产品能够更牢固的结合Strep II融合蛋白，在融合蛋白表达丰度较低时，相对捕获量更高，载量和得率更高。在洗脱方面，可以使用生物-素进行洗脱，比采用昂贵的脱硫生物-素洗脱更经济，且使用后可采用10~50 mM NaOH进行再生。本产品对Strep II标签具有高度特异性，一般只需一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。
2 、产品特点与技术指标
产品名称 | 链霉亲和素的突变体-琼脂糖凝胶 |
基质 | 4%交联琼脂糖 |
配基 | Strep-Tactin 2 配基， ≥5 mg/ml |
粒径范围 a | 45~ 165 μm |
平均粒径 | ~90 μm |
动态结合载量 b | 8~ 10 mg/ml Strep II 标签蛋白 |
推荐工作流速 | 60~ 150 cm/h |
最大流速与压力 | >900 cm/h ，0.3 MPa |
使用 pH | 6~ 10（推荐的工作 pH），10~50 mM NaOH（CIP 清洗） |
化学稳定性 | 在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、8 mol/L 尿素等。 |
储存与运输 | 20%乙醇，2~8 ℃（储存），2~30 ℃（运输） |
注：a90%体积以上的微球在此粒径范围；bDBC10%测试条件为：10%流穿，大肠杆菌表达的带Strap II 标签的增强型绿色荧光蛋白，6 min 停留时间。
3 、Strep II 、Twin Strep 标签亲和层析
Strep-Tactin 2 NUPharose FF对Strep II、Twin Strep标签蛋白的特异性结合以及纯化过程如图1和图2所示。
4 、使用方法参考
4.1 色谱柱装填
以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。
（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
（2）填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完-全读取的稳定体积。Strep-Tactin 2 NUPharose FF的压缩比为1.15 。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速压柱。
（3）填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约3倍填料体积的纯化水洗涤，重复3次，以除去保存液。
（4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。
（5）装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下端的空气，在柱内保留少量的蒸馏水，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。
（6）装填：将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器），为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后，用装柱液将装 柱器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。
（7）压柱：使柱内填料自然沉降（或50~150 cm/h的低流速下沉降），待填料沉降完-全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处；通过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过0.3 MPa），继续压柱至界面清晰 稳定，标记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵 头，下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速平衡柱内的填料。
装柱条件 | Strap-Tactin 2 NUPharose FF |
压缩比 | 1.15 |
装柱流速 | 600 cm/h |
4.2 柱效测定和评价
完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用理论塔板高度（HETP）和非对称因子（As）来评价。
4.3 平衡与上样（Equilibration & Loading）
Strep-Tactin 2 NUPharose FF填料的工作pH范围为6~10，推荐下述缓冲液A为平衡与上样缓冲液。样品需作澄清处理，并用缓冲液A稀释或者换液成缓冲液A。
缓冲液A：100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0。平衡5个柱体积，建议流速为～150 cm/h上样流速为50~150cm/h，较小的流速有利于载量的提高，可根据实际结合情况选择流速，能获得较好的效果。
4.4 再平衡
上样后用缓冲液A再平衡5~10 CV，或平衡至基线，洗去杂质，推荐流速为~150cm/h。
4.5 洗脱（Elution）
推荐含10~50 mM的D-生物-素作为洗脱缓冲液，如下述的缓冲液B。
缓冲液B：50mM d-Biotin，100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH8.0。 用洗脱缓冲液洗6-10 CV，建议流速为～150 cm/h。
4.6 再生（Regeneration）
在一次或多次使用后，需要对填料进行再生：水，3~5 CV，～150cm/h；10~50 mM NaOH，3 CV，3 min接触时间；水，3~5 CV，～150 cm/h；再用缓冲液A平衡5~ 10 CV，150 cm/h。
4.7 填料保存
填料的初始保存液为20%乙醇，使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在2~8 ℃为宜，不可冻存
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