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硫酸葡聚糖-琼脂糖NuPerley DexS-HbP和NuPerley DexS-VirS是将硫酸葡聚糖（Dextran Sulfate）键合在新一代高刚性琼脂糖微球NuPerley 上形成的一种亲和层析分离介质。硫酸葡聚糖又称右旋糖酐硫酸酯，是天然多糖右旋糖酐的合成衍生物，具有与肝素类似的的生物活性，是一种非动物源的仿肝素配基，填料产品被称为仿肝素亲和填料。
产品型号：厂商性质：生产厂家更新时间：2024-10-13访 问 量：1065
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硫酸葡聚糖-琼脂糖
1 、产品介绍
NuPerley DexS-HbP和NuPerley DexS-VirS是将硫酸葡聚糖（Dextran Sulfate）键合在新一代高刚性琼脂糖微球NuPerley 上形成的一种亲和层析分离介质。硫酸葡聚糖又称右旋糖酐硫酸酯，是天然多糖右旋糖酐的合成衍生物，具有与肝素类似的的生物活性，是一种非动物源的仿肝素配基，填料产品被称为仿肝素亲和填料。
NuPerley DexS-HbP的含硫量相对低（40~80μmol/mL），可用于蛋白的亲和分离、纯化，例如血浆蛋白。同时，硫酸酯是一种优良的耐盐型阳离子交换配基，NuPerley DexS-HbP也可作为阳离子交换填料，对溶菌-酶的结合量大于60mg/mL，且在50~150mM NaCl盐浓度下仍结合良好。
NuPerley DexS-VirS的含硫量相对高（70~130 μmol/mL），主要用于用于病毒和病毒样颗粒（VLP）的捕获与纯化。
2 、产品特点与技术指标
产品名称 | 硫酸葡聚糖-琼脂糖 | |
目录编号 | NRPB114L NRPB114S（预装柱） | NRPB115L NRPB115S（预装柱） |
基质 | 高刚性琼脂糖 | |
配基 | 硫酸葡聚糖，含硫量 40~80 μmol/mL | 硫酸葡聚糖，含硫量 70~130 μmol/mL |
粒径范围 a | 30~100 μm | |
平均粒径 | ~60 μm | |
溶菌-酶结合量 | ≥60 mg/mL | ~100 mg/mL |
推荐工作流速 | 60~300 cm/h | |
最大流速与压力 b | >1500 cm/h ，0.3 MPa | |
使用 pH | 4~13（长期稳定性），3~14（CIP 等短时间操作） | |
化学稳定性 | 在常用的水相缓冲液、0.5 mol/L 氢氧化钠、8 mol/L 尿素、30%异丙醇和 70% 乙醇等体系中稳定。8 | |
贮存与运输 | 20%乙醇，2~8 ℃ | |
注：a90%体积以上的微球在此粒径范围；b 10 cm 柱高下的最大测试流速。
3 、使用方法参考
3.1 色谱柱装填
以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。
（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。装柱液一般为纯水，也可含10~100 mM NaCl。
（2）填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完-全读取的稳定 体积。NuPerley DexS-HbP和NuPerleyDexS-VirS 的压缩比为~1.10。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速压柱。
（3）填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约3倍填料体积的纯化水洗涤，重复3次，以除去保存液。
（4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。
（5）装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下端的空气，在柱内保留少量的纯水，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。
（6）装填：将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器），为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后，用装柱液将装柱器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。
（7）压柱：使柱内填料自然沉降（或50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完-全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处；通过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过0.3MPa），继续压柱至界面清晰稳定，标记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵头，下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速平衡柱内的填料。
装柱条件 | NuPerley DexS-HbP | NuPerley DexS-VirS |
压缩比 | 1.10 | |
装柱流速 | 600~1500 cm/h | |
3.2 柱效测定和评价
完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用理论塔板高度（HETP）和非对称因子（As）来评价。
3.3 平衡与上样（Equilibration & Loading）
在上样前，可用初始缓冲液A 在操作流速下平衡层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH 等参数不变。根据应用不同，本产品的缓冲液体系可为磷酸盐、柠檬酸盐和Tris-HCl 等，pH 为4~9 居多，例如10 mM PB + 150 mM NaCl ，pH7.5。
样品通常溶于上述缓冲液A，或者将样品溶液进行换液处理，置换成缓冲液A 体系。上样量可按“mg 目标蛋白/mL 填料"来设定，通常为DBC10% 的50~80%，例如NuPerley DexS-HbP 产品对溶菌-酶的DBC10%为~10 mg/mL，纯化 BSA 时的上样量可为5~10 mg/mL。除了DBC10%，也可以测试上样流穿液中的目标蛋白确定上样量。
3.4 洗脱（Elution）
洗脱过程则可以进一步提高缓冲液A 中的盐浓度，添加0.5~2 M 的NaCl 可将目的 蛋白有效洗脱。在前期工艺筛选时建议用线性梯度洗脱以确定合适的洗脱浓度，在工艺优化和确定时建议用阶跃梯度洗脱，以节省洗脱液体积和提高效率。
3.5 再生（Regeneration）和在位清洗（CIP）
通常上述的再生过程可将填料彻-底清洗。若发生柱压升高，或为了避免交叉污染，可采用以下溶剂进行再生与在位清洗：1~2 mol/L NaCl，0.5 mol/L NaOH、70%乙醇或 30% 异丙醇等。在位清洗可有效去除介质上的杂质，反向效果更佳。清洗后需用3~5 柱体积的纯水除去上述溶剂。
3.6 填料保存
填料的初始保存液为 20%乙醇，使用过后可继续用相同的保存液，也可在20%乙醇的基础上添加0.1~1 M NaCl。保存温度在2~8 ℃为宜，不可冻存。
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