硫酸酯-交联纤维素

硫酸酯-交联纤维素

1 、产品介绍

NuPearla Sulfate是纤维素微球直接硫酸酯化后形成的亲和层析分离介质。与琼脂糖相比，纤维素微球的原料有标准牌号，纤维素骨架不含阴离子基团，纤维素微球的非特异性吸附是琼脂糖微球的1/10~1/3，例如本产品的纤维素基球对细胞色-素C的非特异性吸附量可低至2 μg/mL。经过硫酸酯化后，NuPearla Sulfate对多种活病毒、灭活的或结构分裂的病毒、病毒或微生物抗原和肝素结合蛋白具有亲和力。

同时，硫酸酯是一种优良的耐盐型阳离子交换配基，NuPearla Sulfate也可作为阳离子交换填料，对溶菌-酶的结合量可达180 mg/mL，且在50~200 mM NaCl盐浓度下仍结合良好。

 2 、产品特点与技术指标

注：a90%体积以上的微球在此粒径范围；b 10 cm 柱高下的最大测试流速。

3 、使用方法参考

3.1  色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。

（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

（2）填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完-全读取的稳定 体积。NuPearla Sulfate 的压缩比为 1.15。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速压柱。

（3）填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约3倍填料体积的纯化水洗涤，重复3次，以除去保存液。

（4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。

（5）装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下端的空气，在柱内保留少量的装柱液，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。

（6）装填：将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器），为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后，用装柱液将装柱器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。

（7）压柱：使柱内填料自然沉降（或50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完-全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处；通过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过0.3MPa），继续压柱至界面清晰稳定，标记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵头，下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速平衡柱内的填料。 

3.2  柱效测定和评价

完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用 理论塔板高度（HETP）和非对称因子（As）来评价。

3.3  平衡与上样（Equilibration & Loading）

在上样前，可用初始缓冲液A在操作流速下平衡层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH 等参数不变。根据应用不同，本产品的缓冲液体系可为磷酸盐、柠檬酸盐和Tris-HCl等，pH为4~9居多，例如10 mM PB +50~150 mM NaCl，pH7.5。

3.4  洗脱（Elution）

洗脱过程则可以进一步提高缓冲液A中的盐浓度，添加0.5~2 M的NaCl可将目的蛋白有效洗脱。在前期工艺筛选时建议用线性梯度洗脱以确定合适的洗脱浓度，在工艺优化和确定时建议用阶跃梯度洗脱，以节省洗脱液体积和提高效率。

3.5  再生（Regeneration）和在位清洗（CIP）

通常上述的再生过程可将填料彻-底清洗。若发生柱压升高，或为了避免交叉污染，可采用以下溶剂进行再生与在位清洗：1~2mol/L NaCl，0.5mol/L NaOH、70%乙醇或30%异丙醇等。在位清洗可有效去除介质上的杂质，反向效果更佳。清洗后需用3~5 柱体积的纯水除去上述溶剂。

3.6  填料保存

填料的初始保存液为20%乙醇，使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在2~30 ℃为宜，不可冻存。