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液体样本甘油酶法测定试剂盒

液体样本甘油酶法测定试剂盒,甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能够水解血液中的甘油三酯。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-11-21
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详细介绍

液体样本甘油酶法测定试剂盒

描述:甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能够水解血
液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯;激素
敏感脂肪分解酶能够水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂
肪酸一样,甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标,
但检测更加方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法与经典的
GPO-Trinder 酶学反应方法,通过比色测定液体样本中的甘
油含量。经过优化后,操作步骤更加简单,检测线性范围在
10-1200µmol/L,可靠性和重复性俱佳,适合生物医学、食
品实验室检测。
原理:ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化为 3-磷酸甘油,
再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢;在过氧化物酶作用
下生色底物转化为苯醌亚胺,其光密度值与甘油浓度成正
比。
适用范围:测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘
油浓度。
组成 :(以 250 次为例)
(1) R1 试剂 40 ml
(2) R2 试剂 10 ml
(3) 4 mmol/L 甘油标准品 1 ml
4 ºC 保存,6 个月有效
所需设备:酶标仪、生化分析仪或 721722 型可见光分光
光度计。最佳工作波长 550nm,如无此波长建议优先选用
570nm、次选 530490nm
一 样本处理:
1. 酒类、饮品、清澈液体样本:可直接进行测定,如超过
线性范围可用蒸馏水或生理盐水稀释后再进行测定。
2. 培养液:取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基,
如有细胞碎片应 4ºC,12,000g 离心 5min,取上清进行测
定。
3. 血液:对于新鲜抗凝血而言,可 4ºC2,000g 离心 5min
得到血浆;而对于非抗凝血来说,可先 4ºC 静置 2h
到血清后,2000g 离心 10min,除去血细胞。将得到的血
/血清 70ºC 加热 10 分钟灭活內源脂肪酶,12,000g
离心 10min ,去上清进行测定或-20ºC 保存。
二 工作溶液配制:4:1 比例,取 4 ml 试剂 R1 1 ml
R2 混合即可,立即使用或 4ºC 保存<1 天,变色弃去。
三 标准品稀释:用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致
的液体,将 4 mM 甘油标准品倍比稀释为 1000500
25012562.531.2515.6257.8125 µmol/L,通常
取其中 4~6 管即可,注意设置 0 浓度对照反应管。
四 甘油浓度测定:
1. 参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致,减小实验

误差,可先加入标准品、待测样品,然后再加入工作溶


液。(注意:当甘油浓度较低时,可将待测样品与工作
溶液按照 100µl:100µl 体积进行混合,然后再进行测定,
但是如果样品体积超过 100µl 时将会稀释工作液中酶
的浓度,致使反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过
线性范围的时候,可进行适当稀释,然后根据稀释倍数
来计算样品中甘油浓度。)
2. 37ºC 25ºC 反应 15 分钟。反应平衡后颜色在 60 分钟
内稳定。
3. 先用蒸馏水+工作液的空白管调零,然后测定各管 OD
值。
4. 绘制标准曲线并计算甘油浓度。
Excel 作图步骤:各标准管 OD 值为 y 轴,标准品浓
度为 x 轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选
-散点图-,点击-完成-(2)鼠标右键点图上的某一
点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-
-R 2值-
表一:
酶标微板测定的加样比例(检测范围 10-1200µmol/L
(可对样品和工作液比例进行微量调整)

image.png

参考文献:
1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145

液体样本甘油酶法测定试剂盒





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