天狼猩红染色实验代测

天狼猩红染色实验代测

天狼猩红染色实验简介：

天狼猩红(Picrosirius Red )染色可用于区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原，由于天狼猩红是一种强酸性阴离子染料，可与呈碱性的胶原反应，使胶原纤维在偏振光照射时，产生明显的双折光现象。不同的胶原纤维具有不同的旋光性，在偏振光显微镜下呈现相异的颜色，借以区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原，Ⅰ型纤维：紧密排列， 显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维；Ⅱ型纤维：显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布；Ⅲ型纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维；Ⅳ型纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。

天狼猩红染色实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

2、天狼猩红染色液染色：切片入饱和苦-味酸天狼猩红染色液内染色8min。

3、漂洗：切片入*漂洗数分钟，显微镜下观察满意为止。

4、封片：切片于60°烤箱烤干后于二甲苯透明5min，中性树胶封片。

5、显微镜镜检，图像采集分析。

染色结果：光学显微镜下胶原纤维红色，背景黄色。

注意事项：

1、染液配制时,饱和苦-味酸一定要过饱和,配制时要长时间搅拌后还有不溶的情况下才为饱和的。
2、饱和天狼猩红染液是一种两色混合染液,两种颜色同时都有作色能力,而且存在一定得制约平衡关系,所以染液在使用时随着带入的杂质过多,可能会影响这种平衡关系,所以建议染色结果不对时,应立即更换染液。
3、天狼猩红染色前，需要尽量将水甩干，避免多次染色后带入较多的水分使染液的染色能力下降。
4、染色后脱水时使用新的无水乙醇，并快速脱水，长时间脱水会影响染色结果。
5、如果需要染核，可以先染完天狼猩红后在用苏木素染核。

天狼猩红染色实验代测