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天狼猩红染色实验代测

天狼猩红染色实验代测
实验样本类型:石蜡切片
主要用途:观察组织纤维化程度,及偏振光显微镜进行胶原亚型(I,II,III型)的区分
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  • 更新时间:2023-03-22
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详细介绍

天狼猩红染色实验代测

天狼猩红染色实验简介:

天狼猩红(Picrosirius Red )染色可用于区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原,由于天狼猩红是一种强酸性阴离子染料,可与呈碱性的胶原反应,使胶原纤维在偏振光照射时,产生明显的双折光现象。不同的胶原纤维具有不同的旋光性,在偏振光显微镜下呈现相异的颜色,借以区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原,Ⅰ型纤维:紧密排列, 显示很强的双折光性,呈黄色或红色的纤维;Ⅱ型纤维:显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布;Ⅲ型纤维:显示弱的双折光,呈绿色的细纤维;Ⅳ型纤维:显示弱的双折光的基膜,呈淡黄色。

 

天狼猩红染色实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

2、天狼猩红染色液染色:切片入饱和苦-味酸天狼猩红染色液内染色8min。

3、漂洗:切片入*漂洗数分钟,显微镜下观察满意为止。

4、封片:切片于60°烤箱烤干后于二甲苯透明5min,中性树胶封片。

5、显微镜镜检,图像采集分析。

染色结果:光学显微镜下胶原纤维红色,背景黄色。

注意事项:

1、染液配制时,饱和苦-味酸一定要过饱和,配制时要长时间搅拌后还有不溶的情况下才为饱和的。
2、饱和天狼猩红染液是一种两色混合染液,两种颜色同时都有作色能力,而且存在一定得制约平衡关系,所以染液在使用时随着带入的杂质过多,可能会影响这种平衡关系,所以建议染色结果不对时,应立即更换染液。
3、天狼猩红染色前,需要尽量将水甩干,避免多次染色后带入较多的水分使染液的染色能力下降。
4、染色后脱水时使用新的无水乙醇,并快速脱水,长时间脱水会影响染色结果。
5、如果需要染核,可以先染完天狼猩红后在用苏木素染核。

天狼猩红染色实验代测

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